TEME

Kromatografija na stupcu

Kromatografija na stupcu


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.


Tamo kromatografija (od grčkog χρῶμα, transliterirano in khrôma, "boja"), tehnika je za razdvajanje komponenata homogene smjese na temelju raspodjele njezinih komponenata između dvije faze, jedne stacionarne i one koja se kreće duž definiranog smjera. Ukromatografija na kolonismjer ide od vrha prema dnu i diktira ga staklena cijev (stupac).

Tamo kromatografija na koloni je posebna kromatografska tehnika koja se temelji na svojstvu da neke tvari, nakon što se otope u prikladnim otopinama, djeluju u interakciji s prikladno pripremljenom čvrstom matricom. Pokušat ću bolje objasniti što znači ono što sam upravo napisao!

Kromatografija na stupcu: što je to

To je ništa drugo nego metoda kromatografskog odvajanja koja se odvija u staklenom stupcu. Ova tehnika iskorištava razliku u naboju, veličini, afinitetu veze ili drugim svojstvima komponente koja se izolira kako bi stvorila trake s različitim karakteristikama.

Na fotografijama na ovoj stranici prikazujemo vam sekvencekromatografija na kolonia posebno ekstrakcija eluata, odnosno "djelomično pročišćene" tvari koja izlazi iz završnog izljeva staklene kolone.

Tamokromatografija na kolonivrlo je korisno za pročišćavanje bjelančevina i za odvajanje velikog broja tvari koje se ispituju pojedinačno. Ponekad tvari izolirane sakromatografija na koloni gube svojstva koja su imali unutar smjese. Sve ovisi o tehnicikromatografija na kolonii od supstance koju želite pročistiti.

Kromatografija na stupcu: kako to djeluje

Staklena cijev ispunjena je poroznim čvrstim materijalom, definiranim kao "stacionarna faza". Stacionarna faza ima prikladna kemijska svojstva odabrana na osnovi tvari koja se pročišćava / odvaja od smjese. Kolona se zatim puni puferskom otopinom, također prikladno formuliranom. Otopina međuspremnika naziva se "mobilna faza”I sadrži smjesu koju želite odvojiti.

Smjesa za odvajanje se otopi umobilna faza. Tada dolazi mobilna fazaslojevitana vrhustupaci procijeđena krozstacionarna faza(čvrsta matrica). Na taj se način rješenje difuzno širi dužstupaci tvori kontinuirani pojas duž cijele stacionarne faze. Tvari koje se eluiraju (napuštaju) stupac imaju specifična svojstva temeljena na redoslijedu izbjegavanja.

Da bismo bolje razumjeli, uzmimo primjer pročišćavanja proteina, čak i ako mobilnu fazu može predstavljati bilo koja smjesa. Imat ćemo pojedinačne proteine ​​koji se eluiraju iz stupac manje ili više brzo prema njihovim svojstvima.

Prema vrsti stacionarne faze imamo različite tehnikekromatografija na koloni, Koji:

  • Kromatografija s ionskom izmjenom
  • Hromatografija molekularne isključenja
  • Afinitetna kromatografija

Postoji i skuplja tehnika koja koristi visoki tlak, naimevisokotlačna tekućinska kromatografijaili HPLC.

Kromatografija s ionskom izmjenom

U ionska izmjenjivačka kromatografijačvrsta matrica (stacionarna faza) bogata je pozitivnim ili negativnim nabojima. Podrazumijeva se da jeionska izmjenjivačka kromatografijaiskorištava razlike u vrsti i intenzitetuneto električni nabojpri određenom pH.

U ovom slučaju,stacionarna fazaje sintetički polimer (smola) koji sadrži negativno nabijene skupine (o čemu i govorimokation izmjenjivači) ili pozitivno nabijene skupine (govorimo oanionski skaberi).

Vraćajući se primjeru pročišćavanja proteina, razlika u napunjenosti povezana je s prisutnošću aminokiselina s određenim funkcionalnim skupinama. Afinitet svakog proteina prema nabijenim skupinama odstupacto ovisi o pH koji opet utječe na stanje ionizacije funkcionalnih skupina sastavnih aminokiselina.

Ukromatografija na kolonirješenje koje se priprema za mobilnu fazu je kritično. U našem primjeru s proteinima, koncentracija soli i pH mogu stvoriti gradijent koji može pogodovati istiskivanju određenih proteina.

Ionska kromatografija: kation izmjena

U slučaju ionska kromatografijas matricom kationske izmjene, čvrsti matriks ima negativno nabijene skupine pa će proteini s neto pozitivnim nabojem posljednji poteći iz kolone. Prvi spojevi koji su izašli izstupacto će biti oni s jakim neto negativnim nabojem (odbijanjem od matrice), tada će izaći tvari s djelomičnim negativnim nabojem. Tvari koje se eluiraju kretat će se krozstupacsa brzinom koja ovisi o njihovom neto naboju u otopini koja se koristi.

Hromatografija molekularne isključenja

U tom se slučaju smjesa (mobilna faza) dodaje u jednomstupackoji sadrži apolimers križnim vezama i molekulama izizoliratibit će odvojeni veličinom. Instinktivno se misli da će najmanje molekule prvo izaći iz kolone, ali u stvarnosti je upravo suprotno.

Veće molekule bit će prisiljene proći najkraći put do kraja kolone. Difuzijom će manje molekule moći slobodno prodrijeti u pore čvrste matrice, trebaće im više vremena da se eluiraju. Prvi prikupljeni eluat bit će onaj koji sadrži najveće molekule.

Afinitetna kromatografija na stupcu

Ligand je prisutan u stacionarnoj fazi. Kako otopina koju treba odvojiti prolazi kroz kolonu, molekule koje imaju afinitet za taj ligand tvore specifičnu vezu. Tvari od interesa će se zadržati u prvoj ili posljednjoj frakciji prikupljenoj na temelju vrste upotrijebljenog liganda.

Tekuća kromatografija pod visokim tlakom

Tehnikekromatografija na koloniupravo opisani mogu imati diskretnu razlučivost opsega. Razlog? Svaka tvar ima tendenciju difuzije nakon određenog vremena.

Korištenjem visokotlačnih pumpi povećava se brzina i smanjuje se vrijeme koje molekule putuju kolonom. U tom kontekstu potrebne su kromatografske matrice sposobne izdržati jake pritiske.

Smanjivanjem vremena prolaska kroz kolonu,visokotlačna tekućinska kromatografija(HPLC) ograničava širenje traka i uvelike poboljšava razlučivost sakupljenog eluata.


Video: Телевизор Электрон Ц-382ДИ (Lipanj 2022).